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苎麻香豆酸-3-羟化酶基因的原核表达

作者: 袁有美 郭清泉

关键词: 苎麻 苎麻香豆酸–3–羟化酶 基因克隆 原核表达

摘要:以湘苎3号为材料,采用RT–PCR克隆,获得苎麻香豆酸–3–羟化酶(BnC3H)基因的开放阅读框(ORF)序列,测序正确后将该基因片段连接到原核表达载体pET–22b中,将构建成功的重组子pET–22b–C3H转入BL21并诱导表达.结果显示:BnC3H基因ORF区大小为1536 bp,编码511个氨基酸,推测蛋白相对分子质量为57800,理论等电点为8.61,编码的蛋白质为亲水性蛋白质;重组子在IPTG浓度为1 mmol/L时,融合蛋白的表达量在诱导2 h后达到最高,经IPTG诱导和SDS–PAGE检测,获得的融合蛋白与预期蛋白相符.


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